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產(chǎn)品應(yīng)用

探討流體剪切力對細(xì)胞活動的影響--流體剪切力對細(xì)胞吸收人造細(xì)胞器的影響

丹麥奧胡斯大學(xué)的納米科學(xué)中心近日在SMALL雜志上發(fā)表了一篇關(guān)于納米材料作為有細(xì)胞活性人造細(xì)胞器的文章。文章介紹了個有趣的現(xiàn)象：細(xì)胞在剪切力條件下培養(yǎng)的時候，會吸收更多的納米顆粒，并且沒有附加的細(xì)胞毒性。

文章中采用了內(nèi)皮細(xì)胞和巨噬細(xì)胞做為實驗細(xì)胞。將細(xì)胞培養(yǎng)在ibidi通道載玻片中，之后使用含有納米顆粒的培養(yǎng)基，以一定的剪切力刺激細(xì)胞，細(xì)胞吸收的納米顆粒的量比靜置狀態(tài)下有顯著的升高。

分享一下這個實驗的細(xì)節(jié)，或許大家可以從中找到自己研究領(lǐng)域的靈感。

一、實驗準(zhǔn)備實驗材料及設(shè)備

1.細(xì)胞：內(nèi)皮細(xì)胞、巨噬細(xì)胞

2.納米顆粒：pPDA：在800nm直徑的二氧化硅表面包被多聚多巴胺（dopamine）

pPEG：在800nm直徑的二氧化硅表面包被多聚乙二醇（ethylene glycol）

pRGD：在800nm直徑的二氧化硅表面包被L-精氨酸、甘氨酸和L-天門冬氨酸的多聚物（Arginylglycylaspartic acid ( RGD ) is a tripeptide composed of L -arginine , glycine , and L -aspartic acid）

3.培養(yǎng)耗材：ibidi六通道載玻片μ-Slide VI0.4 Luer （ibidi，Germany，80606）

灌流管，15cm，1.6mm直徑（ibidi，Germany，10962）

串聯(lián)管（ibidi，Germany，10830）

封口夾

1.儀器設(shè)備：ibidi流體剪切力系統(tǒng)，含空氣泵（ibidi，Germany，10905）和流體單元（ibidi，Germany，10903）

一.實驗方法

在實驗開始前一天，請將所有需要使用的試劑，培養(yǎng)基，通道載玻片，灌流管都在37℃的二氧化碳培養(yǎng)箱中放置過夜，排除由于溫度差產(chǎn)生的微量氣泡。

一）培養(yǎng)細(xì)胞

準(zhǔn)備內(nèi)皮細(xì)胞和巨噬細(xì)胞，按照常規(guī)細(xì)胞培養(yǎng)方法進(jìn)行培養(yǎng)。盡量使用比較健康的內(nèi)皮細(xì)胞，以防在做流體實驗時候細(xì)胞不能穩(wěn)定貼壁。

按照下面流程鋪細(xì)胞：

1.按每通道10000個巨噬細(xì)胞和40000個內(nèi)皮細(xì)胞將細(xì)胞鋪于通道載玻片的中，注意，將移液器頭插入注液孔中再加入細(xì)胞懸液，可以輕微傾斜通道載玻片幫助細(xì)胞懸液充滿整個通道。

2.蓋上注液孔蓋，將通道載玻片放入細(xì)胞培養(yǎng)箱中培養(yǎng)半小時，等待細(xì)胞貼壁。細(xì)胞貼壁后，拿出通道載玻片，在每個注液孔中分別加入60μl培養(yǎng)基，注意，槍頭要懸在孔上方滴入培養(yǎng)基。

3.將通道載玻片再放入二氧化碳培養(yǎng)箱進(jìn)行培養(yǎng)2-4小時左右，等到細(xì)胞剛剛長滿為單細(xì)胞層，即可開始實驗。注意，要使用單層細(xì)胞進(jìn)行剪切力實驗，使每個細(xì)胞均受到均勻的剪切力。

一.搭建流體系統(tǒng)

1.將灌流管按照說明放在置在流體單元上。在灌流管的儲液管中加入含納米顆粒的7.5ml培養(yǎng)基。這時不需要連接通道載玻片。實驗前需要去除整個灌流管中的氣泡，存留在灌流系統(tǒng)的氣泡會影響剪切力的大小，有時還會使灌流系統(tǒng)中的液體流動停滯。打開ibidi泵控制系統(tǒng)，在任務(wù)欄中找到“Remove air bubbles”，ibidi流體剪切力系統(tǒng)將自動運行下面任務(wù)，用于去除氣泡。（表一）