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流體剪切力實驗|通道載玻片串連方法步驟|ibidi-雷萌生物

date:2022-07-15 15:12:00

  1.介紹

  

  本應用逐步說明了如何串聯連接多個Luer-Slides。優點是僅使用一個流體單元即可觀察和培養多個載玻片。當使用相同規格的載玻片時,載玻片中的流速是相同的。也可以通過連接不同高度的載玻片來改變剪切速率(例如,µ-Slide I0.2Luer和µ-Slide I0.4Luer)。

  

  本次介紹了兩個載玻片連接的過程。但是它可以應用于大量的載玻片。

  

  2.材料

  

  載玻片:2片 µ-Slides I 0.6Luer, ibiTreat                ibidi (80186)

  

  細胞:Endothelial cells (2.5 · 105 per slide)          e.g. Promocell

  

  培養基:Endothelial Cell Growth Medium            e.g. Promocell

  

  連接器:Serial Connector                                      ibidi (10830)

  

  注射器:帶簡單Luer適配器的無菌注射器(5 ml)

  

  串行連接器:

  

  管道:Silicone Tubing 1.6 mm ID                           ibidi (10842)

  

  適配器:Luer Connector Male                                 ibidi (10824)

  

  將一個塑料連接器插入通道載玻片的兩端(6厘米),以在載玻片之間連接起來。下圖是在兩端帶有兩個配套的Luer公接頭的連接器管。可用乙醇或高壓滅菌消毒接頭。

  

60.png

  

  必須在無菌條件下執行以下步驟!

  

  3. 播種細胞

  

  · 準備1.67 · 106 cells/ml.的細胞懸液。

  

  · 將150 µl注入通道。僅填充通道體積(圖1a)。

  

  · 將帽蓋在Luer接頭上,并將載玻片放在培養箱中培養半小時來固定細胞。

  

  · 細胞固定后,將兩邊儲液接口各加60 µl充滿。

  

  4. 連接載玻片

  

  現在準備載玻片,使細胞在通道中生長,并向儲液池中填充60 µl無細胞培養基(請參見第3節)。

  

  · 在連接之前,將所有儲液器各加60 µl(圖1b)。

  

  · 將連接器管的一個Luer適配器插入載玻片的一個母Luer適配器中(圖1c)。

  

  · 將一些預備的培養基吸入注射器。倒轉注射器并將多余的空氣推出(圖1d)。

  

  · 使用沒有氣泡的注射器在載玻片端口注入。可能會有些溢出(圖1e)。

  

  小心地將液體注入載玻片,直到連接器管中充滿為止(圖1f)

  

78.png

  

  圖1:(a)接種細胞時的用量; (b)載玻片在連接之前已完全填滿; (c)載玻片中插入連接管; (d)無氣泡的注射器; (e)將注射器插入載玻片一端; (f)用注射器推動介質來填充連接器管道

  

  · 當連接器管道完全充滿時(圖2a),將其插入第二張載玻片的接口上(圖2b-d)。

  

  · 如果要連接兩個以上的載玻片,將第二個連接器管放在第二個載玻片空的另一端口上,用注射器推入介質,依此類推。

  

  · 慢慢連接的所有載玻片將注射器從適配器上卸下(圖2e)。

  

  · 要將載玻片連接到灌注套件,兩個Luer容器必須在頂部填充培養基。可用紙巾擦去過多的培養基。

  

77.png

  

  圖2:(a)連接管已完全充滿; (b-c)將連接器管插入第二載玻片的魯爾接頭上; (d)帶有適配接頭管連接; (e)取下注射器; (f)擦去溢出的介質,并填充儲液罐以連接到灌注套件。

  

  5. 連接到灌注裝置

  

  將載玻片連接到灌注套件

75.jpg

  圖片串聯安裝帶有兩個µ-Slides I Luer的一個流體單元

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